Pour la validation des nettoyages, nous faisons un dénombrement bactérien sur milieu R2A de l’eau de rinçage final de nos lavages.

Pour vous, quelle est la précision de la méthode, faut-il faire des dilutions pour une bonne lecture des boites, à partir de combien de colonies cette lecture n’est plus réalisable ?


Je vous pose ce genre de question suite à des résultats microbiologiques illisibles : des dénombrements très élevés de l’ordre de 20000 colonie/100 ml d’eau, lus à une dilution de 1/10. C'est-à-dire que le résultat a été rendu en lisant 2000 CFU sur environ 25 cm2.

Il me semble que l’usage veut qu’au-delà de 100cfu/membrane, des dilutions supplémentaires soient recommandées. Le nouveau référentiel de la Pharmacopee Européenne semble ne pas mentionner le seuil de lisibilité des boites (PA 7ème édition 2011 7.0).


Pouvez-vous m’indiquer un référentiel ou article pouvant m’éclairer à ce sujet ?

Bonjour OCO,
Votre Contexte= Eau purifiée en rinçage final sur cuve formulation lors validation nettoyage. comptage : 2000 CFU/ml !(20000/100 ml dilution 1/10) (Est-ce bien ça?)

Avant de répondre à votre question d'énumération, j'ai une première affirmation: le lavage n'est pas concluant!
La seule valeur attendue est celle de votre qualité d'EP (obligatoirement sous 100 CFU/ml)et non pas 2000 CFU/ml comme indiquée. On attendrai plutôt une valeur < 5 CFU/ml si process de production récent.
Plusieurs hypothèses du dysfonctionnement:
- prélavage en eau potable avec biocharge > 2000 CFU/ml et rinçage eau purifiée pas efficace.
- Cuve bio avec biocharge liée à fermentation ou ... et rinçage non efficace
- souci sur prélèvement...

Préciser un peu mieux votre contexte pour supprimer des hypothèses;

Concernant l'énumération: je n'ai pas connaissance de seuil de lisibilité des boites de Petri. (il me semblait jusqu'à 300 CFU (au delà: non mesurable)
la PE-7 n'exige pas de volume de prélèvement: "le volume de l'échantillon est choisi en fonction du résultat attendu". Pourquoi parler vous de 100 ml? Pourquoi pas 1 ml?
L'USP-34 indique : minimum 1 ml (sur milieu PCA).

Si vous souhaitez quand même suivre la biocharge (qui reste totalement anormale), prélever 1 ml de votre eau de rinçage, à diluer au 1/100.

A vous lire
Très cordialement